随着医疗水平的发展与进步,许多医院都建立了病原微生物实验室,以便为临床诊断和治疗提供及时和可靠的依据。病原微生物检测结果的解读和感染的判定是临床诊断重要依据,也是后期正确治疗的基础。在病原微生物提取的前几个步骤中,是必须直接接触病例的生物学样本的。该过程涉及加热和裂解。当检验人员打开样本容器时,含有病原微生物的气溶胶可能会散布到空气环境中。所以,在负压实验室的生物安全柜中操作更为安全。
生物安全柜通过将柜内的空气连续向外排出,可使柜内负压持续保持。空气由前窗操作口进入负压风道与柜体内空气充分混合后,进入静压箱,再通过高效过滤器处理后垂直向下,以单向层流的状态进入操作区,操作区三面墙体(除前窗玻璃外)均为负压风道,这样在外部环境和操作区之间形成了双层隔离(气幕隔离和箱体隔离)。而且操作区周围均为负压,保证不会泄漏样品,同时由于安全柜的气流方向是由外向内的,顶层设有高效过滤器,气溶胶不易溢出进入实验室,因此病原体提取等操作在生物安全柜内进行,可防止含有病原微生物的气溶胶在实验操作过程中逸出感染检验人员,对检验人员具有非常有效的防护效果。
1.生物安全柜的分类
生物安全柜在医疗器械分类中属于三类,而且生物安全柜分为Ⅰ级、Ⅱ级和Ⅲ级[1],以适用于不同的生物安全等级的微生物检测要求:
1.1一级
通过设施的排气系统进行排气或使用生物制剂时,应保护环境和人员免受气溶胶的侵害,但不能保护产品免受污染。从外部排出的空气或房间再循环到实验室,排气中使用了HEPA过滤器。
1.2二级
通过设施的排气系统正确通风以及处理生物制剂和危险药物时,保护产品,实验室人员和环境。HEPA过滤器用于外部排气或房间再循环,空气供应和排气中均使用HEPA过滤器。因此,它是应用最广泛的。根据入口气流速度和排风循环方式,二级生物安全柜可分为A1、A2、B1、B2四级[2]。
1.2.1在A1安全柜中,通过工作台开口面吸入口的最小平均风速保持在0.38m/s;经过高效过滤器处理后垂直向下的气流,有七成是过滤的原有循环气体,有三成是新吸入经过过滤的补充气体,原有的循环气体有三成通过排气口高效过滤器过滤排放到实验室内。
1.2.2 A2安全柜中,通过工作台开口面吸入口的最小平均风速保持在0.5m/s;经过高效过滤器处理后垂直向下的气流,有七成是过滤的原有循环气体,有三成是新吸入经过过滤的补充气体,原有的循环气体有三成通过排气口高效过滤器过滤排放到室外,不再返回实验室内。
1.2.3 B1安全柜中,通过工作台开放表面吸入口的最小平均风速保持在0.5m/s;经过高效过滤器处理后垂直向下的气流,有三成是过滤的原有循环气体,有七成是新吸入经过过滤的补充气体,即原有的循环气体大部分都通过排气口高效过滤器过滤排放到室外,不再返回实验室内。所有被生物体污染的风管和静压箱应保持负压,或将负压风管和静压箱围起来。
1.2.4 B2安全柜中,通过工作台开放表面吸入口的最小平均风速保持在0.5m/s;经过高效过滤器处理后垂直向下的气流全部是新吸入经过过滤的气体,原有的循环气体全部通过排气口高效过滤器过滤排放到室外,不再返回实验室内。所有受污染的风管和静压箱应保持负压或是被直接排风的风道和静压箱包围。
1.3三级
柜子通过手套与柜子相连,是完全气密式,为确保不受污染,测试产品需要通过双门分动箱进出;在处理风险时保护产品,实验室人员和环境,生物制剂等,通常配备双排气HEPA过滤器,HEPA过滤器放置在空气源中。安全柜适用于埃博拉病原微生物SARS相关实验等高风险场合[3]。
2.生物安全柜的安装使用
在进行病原微生物检测中,必须使用二级或二级以上的生物安全柜,并且在使用必须注意以下几点:
2.1安全柜的使用必须严格按照要求进行操作,如使用前启动“消毒自净”,柜内物品合理摆放,定期维护验证等。生物安全柜一旦发生操作错误,泄漏或损坏,将无法保护操作人员。生物安全柜前的气幕非常脆弱,很容易受到干扰和污染。实验中,前窗位置不能随意打开,操作要轻柔,避免手臂频繁进出安全柜,防止干扰气流。安全柜在工作时,开关门,人员在室内走动,甚至在操作人员身后咳嗽,都会形成湍流,增加微生物气溶胶的溢出风险,造成实验室污染。许多污染事件都是由于实验人员违反操作规程、注意力不集中、操作动作不稳定、操作设备方法不当造成的。因此,在使用时必须牢固树立安全意识,养成良好的操作习惯,杜绝非法操作,严格执行病原微生物检测标准操作规程和生物安全操作规程,使用符合要求的实验室标准化设备。而且在检测操作中生物安全柜的管理非常重要,但往往被忽视,给实验室安全带来很大隐患。必须建立科学的管理制度,严格执行,确保使用安全。
2.2现在仍有很多医院在使用医用洁净工作台,他们认为医用洁净工作台与生物安全柜外观相同,功能相似。事实上,生物安全柜和医用洁净工作台根本上是有很大区别的。在洁净工作台中空气通过高效过滤器净化后,垂直向下吹向操作区,从而保护样品不受污染。但由于操作区是正压状态,气流会向外溢出。它只保护样品,而不为操作者和环境提供保护。在病原微生物检测中将给操作者带来极大的隐患。生物安全柜为负压过滤式通风柜,可防止操作人员和环境接触实验室过程中产生的有害气溶胶。生物安全柜的正确操作可以完全保护操作人员、样品和工作环境。因此,在进行病原微生物检测时,应使用生物安全柜。而且,项目启动前应对实验室的微生物风险进行评估,评估合格后方
